以下三張示意圖展示了不同純化目標(biāo)導(dǎo)向下的三種結(jié)果：

1. 均衡導(dǎo)向：三者指標(biāo)相對均衡，但均無法達(dá)到各自Z大值；

2. 純度-收率優(yōu)先導(dǎo)向：保障高純度與高收率，但樣品處理時(shí)長增加，通量降低；

3. 通量-純度優(yōu)先導(dǎo)向：提升樣品處理速度與純度，但需以犧牲部分收率為代價(jià)。

開始操作前，需考慮以下幾點(diǎn)：

1. 最終產(chǎn)物的交付純度是多少？

2. 目標(biāo)最終產(chǎn)物需為特定的鹽型、固體形態(tài)還是溶液形態(tài)？

3. 如何對純化方案的通量效率與收率進(jìn)行合理權(quán)衡？

在明確純化目標(biāo)后，需建立一套適宜的分析方法，用于評估各項(xiàng)純化條件。通?？上炔捎梅治鲋虬胫苽渲鶃砗Y選方法，從而對大量樣品進(jìn)行快速評估，再通過優(yōu)化流動組合和梯度調(diào)整確定分析方法，并且以此驗(yàn)證關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)結(jié)果。         

在分析篩選階段，一般會對多組實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行測試，以此確定適用于制備純化的工藝參數(shù)。

下圖展示了不同溶劑體系對制備純化所需的兩個(gè)色譜峰分離效果的影響。

以利拉魯肽純化為例，在多種洗脫條件和多種固定相（如Kinetex™C8、Kinetex C18、Kinetex Phenyl-Hexyl）進(jìn)行篩選，確定雜質(zhì)分離效果優(yōu)的條件。

對于粗品樣品而言雜質(zhì)峰通常緊鄰目標(biāo)產(chǎn)物峰，即使分析柱上可實(shí)現(xiàn)預(yù)期分離度，在方法開發(fā)階段也需明確上樣量上限—— 即確定上樣量達(dá)到何種水平時(shí)，分離度會開始下降，為后續(xù)上樣量優(yōu)化奠定基礎(chǔ)。

色譜柱負(fù)載能力或者說載樣量通常是制備色譜工作者最關(guān)注的問題，因其直接影響方法的通量和效率。測定固定相負(fù)載能力的專屬實(shí)驗(yàn)方法為：在經(jīng)分析方法開發(fā)得到的優(yōu)化分析條件下開展上樣量研究，隨后逐步增加樣品上樣量，對目標(biāo)峰所在區(qū)間進(jìn)行分段收集，最終檢測收集餾分的純度。

圖A為典型的分析方法色譜圖。初始狀態(tài)（分析級色譜圖）：上樣量較低，目標(biāo)峰與雜質(zhì)峰分離完-全；可逐步增加樣品上樣量，直至達(dá)到圖 B所示的狀態(tài)（譜帶接觸）上樣量增加至目標(biāo)峰與雜質(zhì)峰邊緣接觸，此時(shí)純度與收率仍能滿足基本要求。若繼續(xù)增加上樣量，化合物的純度或收率會開始下降，即圖 C呈現(xiàn)的結(jié)果（譜帶重疊）。

對于希望計(jì)算理論負(fù)載量時(shí)，可遵循一條簡便的經(jīng)驗(yàn)性上樣法則：在操作參數(shù)經(jīng)合理優(yōu)化的反相高效液相色譜工藝中，通常單位載樣量應(yīng)不低于 1%。該數(shù)值的計(jì)算方式為：每 100 克固定相可承載的粗品質(zhì)量（單位：克）。

研究發(fā)現(xiàn)，正相色譜法的載樣量要高于反相色譜法。但上述結(jié)果并非載樣量的硬性標(biāo)準(zhǔn) —— 這是因?yàn)樯V分離的三項(xiàng)核心參數(shù)（生產(chǎn)效率、收率、純度）相互關(guān)聯(lián)，無法同時(shí)實(shí)現(xiàn)Z大化。因此，固定相的實(shí)際載樣量，本質(zhì)上是這三項(xiàng)參數(shù)之間權(quán)衡的結(jié)果?；诖?，應(yīng)優(yōu)先明確純化目標(biāo)，再在不同的上樣量與餾分收集條件下開展實(shí)驗(yàn)分析，最終篩選出能夠?qū)崿F(xiàn)純化目標(biāo)的工藝參數(shù)。