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黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)方法
黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)方法
黃曲霉毒素 B1（Aflatoxin B1 簡(jiǎn)寫為 AFB1）是目前已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性zui強(qiáng)的一種。黃曲霉毒素 B1 對(duì)人和若干動(dòng)物具有強(qiáng)烈的毒性，其毒性作用主要是對(duì)肝臟的損害。國(guó)家質(zhì)檢總局規(guī)定黃曲霉毒素B1是大部分食品的必檢項(xiàng)目之一。本品的黃曲霉素B1檢測(cè)靈敏度為 5ng/ml（5ppb）。
【黃曲霉素B1檢測(cè)檢測(cè)原理】
本品采用高度特異性的抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)，通過(guò)單克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合 AFB1-BSA 偶聯(lián)物和樣品中可能含有的 AFB1 的原理。試劑含有被事先固定于膜上測(cè)試區(qū)（T）的 AFB1-BSA 偶聯(lián)物和被膠體金標(biāo)記的抗 AFB1 單克隆抗體。
黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)方法【樣 品 制 備】
1. 谷物：任取 5g 以上有代表性樣品并粉碎過(guò) 20 目篩，準(zhǔn)確稱取 2.0g 均勻粉碎試樣于配套離心管中，再準(zhǔn)確加入 4ml 純凈水和 4.0ml 乙酸乙酯，將瓶塞蓋緊密封，充分振蕩 5min，4000rpm 離心 1min 得上清液，將上清液用吸管移出 2.0ml 到蒸發(fā)皿或小玻璃杯中，用電吹風(fēng)吹干上清液，再根據(jù)樣品的種類按以下規(guī)定的稀釋液量，用鋁箔袋內(nèi)配套吸管反復(fù)沖洗，*溶解杯底所有的固體，此溶解液為樣品提取液即檢測(cè)液。考慮不同樣品對(duì)黃曲霉毒素 B1 的zui高含量要求，請(qǐng)參考下表進(jìn)行用稀釋液溶解杯底固體
2. 飼料（以黃曲霉素B1檢測(cè)殘留* 50ppb 計(jì)算）：任取 5g 以上有代表性樣品并粉碎過(guò) 20 目篩，準(zhǔn)確稱取 2.0g 均勻粉碎試樣于配套離心管中，再準(zhǔn)確加入 4ml 純凈水和 4.0ml 乙酸乙酯，將瓶塞蓋緊密封，充分振蕩 5min，4000rpm 離心 1min 得上清液，將上清液用吸管移出 0.5ml 到蒸發(fā)皿或小玻璃杯中，用電吹風(fēng)吹干上清液，再以 2ml 的稀釋液量用鋁箔袋內(nèi)配套吸管反復(fù)沖洗，*溶解杯底所有的固體，此溶解液為樣品提取液即檢測(cè)液。如果黃曲霉素B1檢測(cè)殘留*是 30ppb，則用 1.2ml 的稀釋液溶解；如果殘留*是 40ppb，則用 1.6ml 的稀釋液溶解。
3. 食用油：稱 2.0g 油樣于小燒杯中，用 8ml 正乙烷分次將試樣轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，準(zhǔn)確加入 4ml 純凈水充分振蕩 3min，吸去上層正乙烷層，再加入4ml 的乙酸乙酯，將瓶塞蓋緊密封，充分振蕩 5min，靜置或 3000rpm 離心得上清液，將上清液用吸管移出 2ml 到小玻璃杯中，用電吹風(fēng)吹干，再用稀釋液溶解后為樣品提取液。
4. 醬油、醋、發(fā)酵酒：稱取 25.0g 樣品于小燒杯中，用 5ml 蒸餾水將試樣轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，加入 20ml 三氯甲烷，加塞輕輕振搖 3min，靜置分層。放出下層三氯甲烷層，經(jīng)盛有約 5g 預(yù)先用三氯甲烷濕潤(rùn)的無(wú)水過(guò)濾器于蒸發(fā)皿中，zui后用少量三氯甲烷洗滌過(guò)濾器，洗液并于蒸發(fā)皿中，用電吹風(fēng)吹干。吹干冷卻后，準(zhǔn)確加入稀釋液，將蒸發(fā)皿中的凝結(jié)物充分溶解。
黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)方法【黃曲霉素B1檢測(cè)步驟】
1. 在進(jìn)行黃曲霉素B1檢測(cè)前先完整閱讀使用說(shuō)明書，使用前將試紙卡和待檢樣本溶解恢復(fù)至室溫；
2. 從原包裝袋中取出試紙卡，打開(kāi)后平放在桌面上，請(qǐng)?jiān)?1 小時(shí)內(nèi)盡快使用；
3. 用吸管吸取待檢樣品溶液，滴加 3 滴于加樣孔中，加樣后開(kāi)始計(jì)時(shí)；
4. 結(jié)果應(yīng)在 10min 內(nèi)讀取，超過(guò) 12min 的時(shí)間判讀無(wú)效。
【黃曲霉素B1檢測(cè)結(jié)果判定】
1. 陽(yáng)性：位置 C 顯示出紅色線條，而位置 T 不顯色時(shí)，或者位置 C 顯示出紅色線條，位置 T 顯示顏色非常模糊時(shí)，判為陽(yáng)性。陽(yáng)性結(jié)果表明：AFB1 含量超過(guò)樣品允許量。
2. 陰性：位置 C 顯示出紅色線條，位置 T 同時(shí)顯示出紅色線條，且 T 線顏色接近 C 線或者深于 C 線時(shí)，判為陰性。陰性結(jié)果表明：AFB1 含量低于樣品允許量。
3. 無(wú)效：位置 C 不顯示出紅色線條，而位置 T 顯示出紅色線條，該試紙卡視為無(wú)效。建議使用新的試紙卡按本說(shuō)明書要求重新測(cè)試。
【黃曲霉素B1檢測(cè)注意事項(xiàng)】
1. 請(qǐng)按照操作步驟進(jìn)行黃曲霉素B1檢測(cè)，操作時(shí)請(qǐng)勿觸摸試紙顯示區(qū)。
2. 如購(gòu)買時(shí)發(fā)現(xiàn)過(guò)期，破損，污染，無(wú)效的產(chǎn)品，請(qǐng)到購(gòu)買處進(jìn)行更換。
3. 黃曲霉素B1檢測(cè)試紙卡為一次性產(chǎn)品，請(qǐng)勿重復(fù)使用。
4. 如遇稀釋液不足，請(qǐng)用蒸餾水加入稀釋液中混勻后使用。
5. 本品為篩選試劑，任何陽(yáng)性結(jié)果請(qǐng)用其他方法做進(jìn)一步確認(rèn)。
6. 有條件的實(shí)驗(yàn)室可以用 AFB1 標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)試后作為判斷參考。
【儲(chǔ)藏條件與有效期】
本品應(yīng)保存在干燥陰涼處（4--30℃），有效期 18 個(gè)月。