目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細(xì)胞>>細(xì)胞系>> BY-1350CHO-E0中國倉鼠卵巢細(xì)胞株細(xì)胞系
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來源與馴化:該細(xì)胞系源自 CHO-K1 細(xì)胞,通過多輪非選擇性傳代與適應(yīng)性培養(yǎng)獲得:初期以廣譜表達(dá)能力為指標(biāo),篩選能穩(wěn)定表達(dá)多種外源蛋白(如細(xì)胞因子、抗體片段)的克??;后續(xù)經(jīng)含血清與無血清培養(yǎng)基雙向適應(yīng),增強(qiáng)培養(yǎng)模式的靈活性,最終獲得 CHO-E0 株系?!癊0" 代表其作為 “基礎(chǔ)型(E)零改造(0)" 細(xì)胞的特性,標(biāo)識其未引入外源基因改造的通用屬性。
形態(tài)與增殖:體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài),貼壁生長時呈多角形,排列規(guī)則;懸浮培養(yǎng)形成直徑 20-60μm 的松散聚集體,細(xì)胞圓潤飽滿,活力長期維持在 93% 以上。37℃、5% CO?條件下,增殖周期約 26-32 小時,兼容含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基與多種無血清化學(xué)限定培養(yǎng)基,傳代 150 次以上仍保持穩(wěn)定生長速率,外源蛋白表達(dá)量波動<10%,凍存復(fù)蘇后存活率超 90%。
表達(dá)特征:該細(xì)胞系的核心優(yōu)勢在于廣譜適配性:轉(zhuǎn)染不同類型表達(dá)載體(如質(zhì)粒、病毒載體)后,重組蛋白表達(dá)量可達(dá) 2-5g/L(流加培養(yǎng)),尤其對難表達(dá)蛋白(如膜蛋白、多亞基復(fù)合體)的適配性突出。以 G 蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)表達(dá)為例,其膜定位率達(dá) 85% 以上,比普通 CHO-K1 提升 20%,且受體配體結(jié)合活性保留率超 90%,為功能研究提供高質(zhì)量樣本。
基礎(chǔ)研究模型構(gòu)建
重組蛋白生產(chǎn)
藥物開發(fā)工藝優(yōu)化
貼壁培養(yǎng)操作:
復(fù)蘇:從液氮取出凍存管,37℃水浴 1-2 分鐘解凍,轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基(DMEM/F12+10% 胎牛血清)的離心管,1000rpm 離心 5 分鐘,重懸后接種至 T75 培養(yǎng)瓶,37℃、5% CO?培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。
換液:接種 24 小時后更換培養(yǎng)基,去除未貼壁細(xì)胞,此后每 48 小時換液一次,維持培養(yǎng)基 pH 7.2-7.4。
傳代:當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80%-90% 時,棄培養(yǎng)基,PBS 清洗 2 次,加入 2mL 0.25% yi酶 - EDTA,37℃孵育 2-3 分鐘,鏡檢細(xì)胞脫落后加入 8mL 培養(yǎng)基終止消化,按 1:5 比例傳代至新培養(yǎng)瓶。
懸浮培養(yǎng)操作:
凍存流程:取對數(shù)生長期細(xì)胞,1000rpm 離心 5 分鐘,用凍存液(70% wan全培養(yǎng)基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO)重懸至 5×10?個 /mL,分裝至凍存管,程序降溫盒 - 80℃過夜,次日轉(zhuǎn)移至液氮保存,保存期可達(dá) 5 年以上。
優(yōu)勢:遺傳穩(wěn)定性優(yōu)異,長期傳代無明顯表型漂移;對不同表達(dá)載體兼容性強(qiáng),無需針對特定蛋白優(yōu)化細(xì)胞系;培養(yǎng)條件寬松,可在含血清與無血清培養(yǎng)基間靈活切換;成本可控,適合大規(guī)?;A(chǔ)研究與工藝開發(fā)。
局限性:重組蛋白表達(dá)量低于專項(xiàng)改造株(如 CHO-D3b);對部分復(fù)雜糖基化蛋白的修飾能力有限;懸浮培養(yǎng)時聚集體大小不均一(10-100μm),需優(yōu)化攪拌參數(shù)。
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