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人白細(xì)胞介素6ELISA檢測(cè)試劑盒操作事項(xiàng)
閱讀：321 發(fā)布時(shí)間：2023-12-26操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，并盡量避免起泡。
1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?/span>100μL，標(biāo)準(zhǔn)品孔分別加入依次梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，待測(cè)樣品孔加待測(cè)樣品100μL，給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育60分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。立即每孔加入配好的生物素標(biāo)記的抗IL-6蛋白抗體工作液100μL（在使用前15 分鐘內(nèi)配制），注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育60分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干；
4.立即每孔加入配好的鏈霉親和素HRP工作液100μL（在使用前15分鐘內(nèi)配制），注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育45分鐘;
5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μL/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干；
6.每孔加TMB底物溶液(TMB)100μL，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右（根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長，但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)，即可終止）。
7.每孔加終止液100μL，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測(cè)量各孔的光密度（OD值）。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測(cè)程序。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
注意事項(xiàng)：
1.保存：試劑盒中各試劑請(qǐng)按說明書提示合理存放。在儲(chǔ)存及溫育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染，否則可能會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)果。
2.酶標(biāo)板：剛開啟的酶標(biāo)板孔中可能會(huì)有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。暫時(shí)不用的板條應(yīng)拆卸后放入備用鋁箔袋，按推薦溫度存放！
3.加樣：加樣或加試劑時(shí)，第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔的加樣時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育"時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。每次的加樣時(shí)間最好控制在10分鐘內(nèi)。推薦設(shè)置復(fù)孔。
4.溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)必須給酶標(biāo)板覆膜；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度。
5.洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水。在讀數(shù)前要注意清除底部殘留的液體和手指印，以免影響酶標(biāo)儀讀數(shù)。
6.顯色時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如每隔5分鐘），如梯度已很明顯，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免顏色過深影響酶標(biāo)儀讀數(shù)。
7.底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
8.混勻：充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，最好使用微量振蕩器(使用低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標(biāo)板框混勻。
9.安全：試驗(yàn)中請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測(cè)血液或者其他體液樣品時(shí)，請(qǐng)按國家生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條例執(zhí)行。
10.不同批號(hào)的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）
11.試驗(yàn)中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁混用，否則將影響試驗(yàn)結(jié)果！