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原代細胞指直接從生物體組織或器官中分離出的初始細胞
原代細胞是指直接從生物體組織或器官中分離出的初始細胞，未經(jīng)傳代培養(yǎng)。原代細胞是指直接從機體組織或器官中分離、經(jīng)酶解或機械分散后獲得的初始細胞，未經(jīng)過體外長期傳代培養(yǎng)(通常傳代次數(shù)≤5 代)，保留了來源組織的原始細胞形態(tài)、生理功能和遺傳特征，更貼近體內細胞的真實狀態(tài)。
與傳代細胞的區(qū)別
來源：原代細胞直接取自組織，傳代細胞為原代細胞多次分裂后的產物。
增殖能力：原代細胞增殖有限，傳代細胞可無限增殖(如腫瘤細胞系)。
用途：原代細胞更貼近真實生理狀態(tài)，傳代細胞適合大規(guī)模生產。
培養(yǎng)要點
分離方法：需用胰蛋白酶等消化酶處理組織，獲得單細胞懸液。
適應期：分離后需24小時適應培養(yǎng)環(huán)境，確?；钚?zwnj;。
嚴格無菌：操作需避免污染，維持細胞穩(wěn)定性。
原代細胞的保存方法根據(jù)保存時長和細胞類型有所不同，以下是具體分類及操作要點：
短期保存(數(shù)小時至數(shù)天)
貼壁細胞
懸液保存：用胰酶消化后離心，重懸于含10%-20%胎牛血清的培養(yǎng)基中，4℃冷藏(1-3天)。
直接靜置保存：更換新鮮培養(yǎng)基后4℃冷藏，僅限1-2天，需及時傳代。
懸浮細胞
離心后重懸于含血清培養(yǎng)基，4℃冷藏(1-3天)或室溫(1天內)，避免細胞沉降。
中期保存(數(shù)周至數(shù)月)
冷凍保存：使用含保護劑的凍存液，通過程序降溫盒或儀器控制降溫速率(1-3℃/min)，后保存于-80℃或液氮(-196℃)。
液氮冷凍：采用“慢凍快融”原則，細胞需處于對數(shù)生長期，凍存后復蘇時需快速投入37-38℃水浴融化。