DT40雞淋巴瘤細胞

細胞介紹

DT40是來自Hyline SC雞法氏囊淋巴細胞株經(jīng)鳥類白血病病毒誘導建株的。原始淋巴瘤用羅氏相關(guān)病毒1(RAV-1)感染出生１天的xiao雞得到。法氏囊中生成的腫瘤制成細胞懸液后通過靜脈注射輸入同基因型的受體xiao雞。經(jīng)過一次體內(nèi)移植后，建立了DT40細胞株。 這株細胞包含的前病毒基因整合在c-myc原癌基因的上游，表達的c-myc RNA水平較高。它缺少一個正常c-myc基因，但含有兩個拷貝ALV去調(diào)控的myc基因。這株細胞保留了重排免疫球蛋白輕鏈基因(IgL)的能力。 在IgL位點，DT40包含一個重排和一個胚系同源基因。c-rel基因和v-rel癌基因在DT40細胞株中都能誘導組織相容性(MHC)II類抗原表達。v-rel 誘導的MHCII表達比c-rel誘導快，且其有效性在數(shù)周后達到c-rel的50倍。這株細胞呈淋巴母細胞表型。傳染性檢測表明DT40釋放低水平的傳染性RAV-1。這株細胞可以用于穩(wěn)轉(zhuǎn)研究。

細胞特性

1） 來源：法氏囊，淋巴瘤

2） 形態(tài)：淋巴母細胞，懸浮

3） 含量：>1x10^6 細胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

DT40雞淋巴瘤細胞

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理：

1） 收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3） 懸浮細胞：T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基）。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                    (0001)                         84%

       優(yōu)質(zhì)胎牛血清                                  （0500）                      10 %

       雞血清                                              （9080）                       5 %

       β-巰基乙醇                                          (8211)                        0.05mM

       P/S青霉素-鏈霉素                             （15140-122）           1%

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

懸浮狀態(tài)下生長的細胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加*培養(yǎng)基來維持細胞的生長狀態(tài)，一般情況下細胞密度維持在1×105~1×106個/mL（不同細胞對密度要求不同，）可以維持細胞的正常生長。如需分瓶可以將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。