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中藥丸劑DNA提取的完整步驟
藥丸劑是藥材細(xì)粉或藥材提取物加適宜粘合劑或輔料，制成的球形或類球形的固體制劑，是中成藥古老的劑型之一。PCR的DNA檢測(cè)方案正在成為中藥材真?zhèn)舞b定的金標(biāo)準(zhǔn)，但是加工后的中藥丸由于成分復(fù)雜，包括粘合劑和輔料對(duì)PCR反應(yīng)有抑制作用，導(dǎo)致DNA檢測(cè)方法不能有效應(yīng)用于這個(gè)領(lǐng)域。本試劑盒通過(guò)自主開(kāi)發(fā)的DNA提取方法，對(duì)一些PCR抑制成分進(jìn)行有效的清洗，從而達(dá)到有效的DNA提取純度。提取的DNA可直接用于PCR反應(yīng)，為藥材的真?zhèn)舞b定和摻假檢測(cè)提供了一個(gè)可靠的檢測(cè)方案。
裂解處理：
將丸劑研磨成粉末，加入含蛋白酶K的裂解液（如CTAB緩沖液），56℃水浴1-2小時(shí)，破壞細(xì)胞膜并降解蛋白質(zhì)。若樣本含多糖，可加入β-巰基乙醇抑制干擾。
吸附純化：
磁珠法：將裂解液與磁珠混合，DNA特異性吸附后，用含離液鹽的洗滌液去除雜質(zhì)。
離心柱法：裂解液過(guò)硅膠膜柱，DNA結(jié)合后，用乙醇洗滌鹽分和色素。
洗脫與質(zhì)檢：
用TE緩沖液或無(wú)菌水洗脫DNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)A260/A280比值（1.8-2.0為合格）。電泳觀察條帶完整性，避免拖尾或彌散。
注意事項(xiàng)：
操作全程戴手套，避免DNA酶污染。
多糖含量高時(shí)，可增加洗滌次數(shù)或使用低pH值法。
陳舊樣本需延長(zhǎng)裂解時(shí)間。
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