在成功構(gòu)建AS-CPT-4 NPs后，團(tuán)隊(duì)利用腫瘤球探究了AS-CPT-4 NPs的抗結(jié)腸癌活性，除腫瘤球生長曲線外，利用激光共聚焦顯微鏡探究了AS-CPT-4 NPs對(duì)結(jié)腸癌腫瘤球的殺傷作用。結(jié)果顯示未經(jīng)處理的腫瘤球維持了良好的活性，而AS-CPT-4納米顆粒和AS組合CPT處理誘導(dǎo)了不同程度的細(xì)胞死亡，其中AS-CPT-4納米顆粒表現(xiàn)出更強(qiáng)的細(xì)胞毒性。AS-CPT-4 NPs在體內(nèi)結(jié)腸癌小鼠模型中同樣展現(xiàn)出強(qiáng)大的抗腫瘤作用，實(shí)現(xiàn)了79.86%的腫瘤生長抑制率。此外，AS-CPT-4納NPs的腫瘤體積增長曲線更平緩，表明AS-CPT-4納米顆粒能夠有效抑制腫瘤生長。

 圖2：AS-CPT-4 NPs的體內(nèi)外抗結(jié)腸癌活性

團(tuán)隊(duì)利用MST，CETSA，及AS-CPT-4 NPs與NCL共定位實(shí)驗(yàn)證明AS1411與CPT偶聯(lián)后沒有影響AS1411對(duì)于NCL的靶向性，表明AS-CPT-4 NPs具有良好的腫瘤靶向性。

圖3：AS-CPT-4 NPs靶向NCL

進(jìn)一步在作用機(jī)制研究中，AS-CPT-4 NPs能夠抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)拓?fù)洚悩?gòu)酶I介導(dǎo)的DNA損傷，并通過AS1411調(diào)控的IκK通路抑制，消除由CPT引發(fā)的NF-κB活化。有趣的是，研究發(fā)現(xiàn)，偶聯(lián)物中的AS1411能夠重編程免疫抑制性腫瘤微環(huán)境，具體表現(xiàn)為增加CD8+ T細(xì)胞的浸潤，同時(shí)耗竭CD4+ T細(xì)胞群。確立了AS-CPT-4納米顆粒作為具有化療和抗腫瘤免疫治療雙重功能的納米治療平臺(tái)。

圖4：AS-CPT-4 NPs的抗結(jié)腸癌機(jī)制

本研究不僅成功開發(fā)了具有高效低毒抗結(jié)腸癌活性的多價(jià)偶聯(lián)物AS-CPT-4，同時(shí)該方法開創(chuàng)了一條將中等毒性天然產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為靶向偶聯(lián)藥物的新途徑，并為進(jìn)一步探索核酸適配體在協(xié)同療法中的潛力奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

值得提到的是該研究中AS-CPT-4 NPs對(duì)結(jié)腸癌腫瘤球的殺傷作用數(shù)據(jù)獲取得到了成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中心平臺(tái)孫晨老師的技術(shù)支持。該平臺(tái)全新購置的的奧偉登（Evident）FV4000激光掃描共聚焦配備全新的高靈敏硅基半導(dǎo)體檢測(cè)器SilVIR，具有更高的靈敏度和更大的動(dòng)態(tài)范圍，從而可允許采用較低的激光強(qiáng)度即可獲得高信噪比圖像，大大降低了激光毒性。同時(shí)FV4000具有超高的掃描速度，大大提高了多色3D腫瘤球數(shù)據(jù)獲取的效率。奧偉登（Evident）FV4000多色全光譜型定量共聚焦顯微鏡已在生命科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)得到了廣泛的認(rèn)可與應(yīng)用，展現(xiàn)出其在生物成像方面的非凡魅力與表現(xiàn)。