賽默飛色譜及質(zhì)譜
【藥典】生物藥-高分辨液質(zhì)用于膠原蛋白的質(zhì)量評(píng)價(jià)
檢測(cè)樣品:膠原蛋白
檢測(cè)項(xiàng)目:分析鑒定
方案概述:無論是天然膠原蛋白的鑒定,還是重組膠原蛋白的分子量、序列覆蓋度、N端和C端鑒定,以及重組膠原蛋白產(chǎn)品中膠原蛋白的鑒定,都離不開液相色譜-高分辨質(zhì)譜。本文以O(shè)rbitrap質(zhì)譜檢測(cè)器為基礎(chǔ),介紹膠原蛋白液質(zhì)檢測(cè)方法。
膠原作為細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分,是脊椎動(dòng)物體內(nèi)含量最豐富的蛋白。膠原研究歷程與人們對(duì)生命本質(zhì)的認(rèn)識(shí)過程密不可分,從纖維學(xué)說到細(xì)胞學(xué)說確立,經(jīng)歷了數(shù)百年的歷程。近百年來,膠原的應(yīng)用從制革和黏合劑等,逐漸拓展至食品、藥品、化妝品、生物材料,近年來拓展至組織工程、再生醫(yī)學(xué)及干細(xì)胞定向轉(zhuǎn)化等。可分泌膠原的細(xì)胞主要包括間充質(zhì)細(xì)胞及其行生細(xì)胞,包括成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成牙本質(zhì)細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞和成骨細(xì)胞,其他合成膠原的細(xì)胞還包括上皮、內(nèi)皮、肌肉和雪旺氏細(xì)胞。膠原合成過程研究已經(jīng)較為深入,不同膠原具有類似的合成過程。膠原蛋白分子長(zhǎng)約300nm、直徑約1.5nm,由3條副鏈以平行、右旋的形式纏繞而成,組成膠原蛋白的肽鏈自身為左手螺旋結(jié)構(gòu)。每條肽鏈的序列特征表現(xiàn)為每隔兩個(gè)其它氨基酸殘基即有一個(gè)甘氨酸,其序列可用Gly-X-Y表示(X常為脯氨酸,Y常為羥脯氨酸或羥賴氨酸)。根據(jù)構(gòu)成其肽鏈的差異,膠原蛋白可分為多種類型,目前人們?cè)诩棺祫?dòng)物中已鑒別出至少28種大小、序列、組織分布、分子組成各異的膠原蛋白。
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