賽默飛色譜及質(zhì)譜
【藥典】生物藥-陰離子交換-親水混合色譜的GlyPaCAXH色譜柱分析人促紅細(xì)胞生成素(EPO)N糖
檢測(cè)樣品:重組人促紅細(xì)胞生成素(EPO)
檢測(cè)項(xiàng)目:N糖唾液酸分布
方案概述:本文考察使用PNG酶,對(duì)比非還原酶切和二硫蘇糖醇(DTT)還原條件下酶切人促紅細(xì)胞生成素(EPO)的N糖,使用2-AB標(biāo)記后在陰離子交換和親水相互作用雙模式下的GlycanPacAXH色譜柱上的以唾液酸數(shù)目差異進(jìn)行分組分離的結(jié)果差異。為高唾液酸化的蛋白的N糖分析提供參考。
重組人促紅細(xì)胞生成素(EPO)廣泛應(yīng)用于治療腎性貧血以及 腫瘤等各種慢性疾病所伴發(fā)的貧血。EPO 是一種單鏈的酸性糖 蛋白,分子量為 32000-39000Dar,EPO 的糖基包括 3 個(gè) N2 糖 鏈(分別位于 Asp 24,Asp 38,Asp 83)和一個(gè) O 糖鏈(位 于 Ser126)。他們的主要成分是甘露糖,巖藻糖和唾液酸等 [1]。 其中,唾液酸在維持 EPO 分子的酸性,阻斷細(xì)胞表面半乳糖受 體結(jié)合,防止 EPO 失活等方面有重要作用 [2]。本文采用了非還 原酶切和 DTT 還原酶切 N 糖鏈, 2-AB 標(biāo)記后,經(jīng)過(guò) Hypersep AminoPropyl 小柱凈化后的糖鏈樣品,在 Glypac AXH 的 HPLC 和 UHPLC 色譜柱上進(jìn)行分析。 Glypac AXH 混合模式色譜柱通過(guò)獨(dú)特的陰離子交換和 HILIC 雙 重模式,可以將 N 糖按照唾液酸數(shù)目大小進(jìn)行分組分離,比單 純的 HILIC 模式色譜柱給出更豐富的唾液酸分布信息,非常適 合用于 EPO 類高唾液酸化的蛋白的 N 糖唾液酸分布測(cè)定。
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